細(xì)胞增殖及細(xì)胞毒性檢測試劑盒(WST-1法)使用方法：

一、樣品的準(zhǔn)備：

方法一：LDH釋放檢測

a.根據(jù)細(xì)胞的大小和生長速度將適量細(xì)胞接種到96孔細(xì)胞培養(yǎng)板中，使待檢測時細(xì)胞密度不超過80-90%滿。

b.吸去培養(yǎng)液，用PBS液洗滌一次。換新鮮培養(yǎng)液(推薦使用含1%血清的低血清培養(yǎng)液或適當(dāng)?shù)臒o血清培養(yǎng)液)，將各培養(yǎng)孔分成如下幾組：包括無細(xì)胞的培養(yǎng)液孔(背景空白對照孔)，未經(jīng)藥物處理的對照細(xì)胞孔(樣品對照孔)，未經(jīng)藥物處理的用于后續(xù)裂解的細(xì)胞孔(樣品最大酶活性對照孔)，以及藥物處理的細(xì)胞孔(藥物處理樣品孔)，并做好標(biāo)記。按照實驗需要給予適當(dāng)藥物處理(如加入0-10μl左右特定的藥物刺激，可設(shè)置不同濃度，不同處理時間，對照孔中需加入適當(dāng)?shù)乃幬锶軇φ?，繼續(xù)按常規(guī)培養(yǎng)。到預(yù)定的檢測時間點前1小時，從細(xì)胞培養(yǎng)箱里取出細(xì)胞培養(yǎng)板，在“樣品最大酶活性對照孔”中加入試劑盒提供的LDH釋放試劑，加入量為原有培養(yǎng)液體積的10%。加入LDH釋放試劑后，反復(fù)吹打數(shù)次混勻，然后繼續(xù)在細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育。

c.到達預(yù)定時間后，將細(xì)胞培養(yǎng)板用多孔板離心機400g離心5min。分別取各孔的上清液120μl，加入到一新的96孔板相應(yīng)孔中，隨即進行樣品測定。

方法二：細(xì)胞增殖及細(xì)胞毒性檢測試劑盒(WST-1法)細(xì)胞內(nèi)總LDH的檢測

a.細(xì)胞毒性檢測：根據(jù)細(xì)胞的大小和生長速度將適量細(xì)胞接種到96孔細(xì)胞培養(yǎng)孔板中，使待檢測時細(xì)胞密度不超過80-90%滿。加入不同藥物進行處理，并設(shè)置適當(dāng)對照。藥物刺激完畢后，將細(xì)胞培養(yǎng)板用多孔板離心機400g離心5min。盡量吸除上清，加入150μl 用PBS稀釋了10倍的試劑盒提供的LDH釋放試劑(10體積PBS中加入1體積LDH釋放試劑并混勻)，適當(dāng)搖晃培養(yǎng)板混勻，然后繼續(xù)在細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育1小時。隨后將細(xì)胞培養(yǎng)板用多孔板離心機400g離心5min。分別取各孔的上清液120μl，加入到一新的96孔板相應(yīng)孔中，隨即進行樣品測定。

b.細(xì)胞增殖檢測：根據(jù)細(xì)胞的大小和生長速度將適量細(xì)胞接種到96孔細(xì)胞培養(yǎng)孔板中，使促進細(xì)胞增殖的藥物刺激后細(xì)胞不超過80-90%滿為宜。使用不同的藥物刺激細(xì)胞，并設(shè)置適當(dāng)對照。藥物刺激完畢后，將細(xì)胞培養(yǎng)板用多孔板離心機400g離心5min。盡量吸除上清，加入150μl 用PBS稀釋了10倍的試劑盒提供的LDH釋放試劑(10體積PBS中加入1體積LDH釋放試劑并混勻)，適當(dāng)搖晃混勻，然后繼續(xù)在細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育1小時。隨后將細(xì)胞培養(yǎng)板用多孔板離心機400g離心5min。分別取各孔上清液120μl，加入到一新的96孔板相應(yīng)孔中，隨即進行樣品測定。

? 注：LDH釋放檢測更加常用一些，細(xì)胞內(nèi)總LDH檢測通常可以使用MTT、WST-1或CCK-8等方法替代。