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技術文獻

團頭魴尾鰭細胞;WCF復蘇操作要點

文字:[大][中][小] 2021-8-3    瀏覽次數:565    
團頭魴尾鰭細胞;WCF復蘇操作要點:

1)將培養基在37℃水浴鍋預熱;準備一個15mL無菌的離心管,加入8mL預熱培養基。

2)將凍存細胞從液氮罐中取出,快速放入37℃水浴鍋中復溫(可準備一潔凈的燒杯,裝滿37℃的水,細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內,再逐步轉移到水浴鍋中)。輕輕晃動凍存管,使細胞能在1~2min內完全解凍,使細胞能盡快通過zui易受損的溫度段(-5~0℃)。注意凍存管管口不能沒入水中,BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。
3)用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內,將管內細胞轉移至準備好的離心管內,輕輕吹打液體,使細胞均勻分散,降低DMSO濃度,吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養基洗管壁2次,均轉移至離心管內。
4)800rpm離心5min,棄上清,加入新鮮的培養基,吹打制成細胞懸液。
5)將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內,補加適量的培養基,輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻,放入溫箱內培養。

6)第二天觀察細胞貼壁生長情況,換新鮮培養基以去除死細胞。繼續培養,待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經過2~3次傳代,細胞活力恢復后才能進行后續的實驗。

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U-2 OS, 人骨肉瘤細胞
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SW 1990 [SW-1990, SW1990] , 人胰腺癌細胞
C6, 大鼠腦膠質瘤細胞
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Hela, 人宮頸癌細胞系
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RL95-2, 人子宮內膜腺癌細胞系
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MCF-7 [MCF7], 人乳腺癌細胞系
Raw264.7, 小鼠單核巨噬細胞白血病細胞
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